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看完这些你就知道该如何操作激光共聚焦显微镜了
发布时间:2020-08-19   点击次数:99次
  你知道该如何使用激光共聚焦显微镜么?下面就让我们一起来了解一下吧。
 
  一、观察及仪器操作
 
  1. 开启仪器电源及光源
 
  一般先开启显微镜和激光器,再启动计算机,然后启动操作软件,设置荧光样品的激发光波长,选择相应的滤光镜组块。以便光电倍增管(photo multiplier tube,PMT)检测器能得到足够的信号结果。使用汞灯的注意事项同普通荧光显微镜。
 
  2. 设置相应的扫描方式
 
  在目视模式下,调整所用物镜放大倍数,在荧光显微镜下找到需要检测的细胞。切换到扫描模式,调整双孔针和激光强度参数,即可得到清晰的共聚焦图像。
 
  3. 获取图像
 
  选择合适的图像分辨率,将样品完整扫描后,保存图像结果即可。
 
  4. 关闭仪器
 
  仪器测定样品结束后,先关闭激光器部分,计算机仍可继续进行图像和数据处理。若要退出整个激光扫描共聚焦显微镜系统。则应该在激光器关闭后,待其冷却至少10分钟后再关闭计算机及总开关。
 
  二、获取三维图像
 
  激光扫描共聚焦显微镜具有细胞“CT”功能,因此,它可以在不损伤细胞的情况下,获得一系列光学切片图像。选用“Z-Stack"模式,即可实现此项功能。
 
  1. 开启“Z-Stack”选项。
 
  2. 确定光学切片的位置及层数。
 
  3. 启动“Start”,获得三维图像。
 
  三、获取时间序列图像
 
  共聚焦显微镜的"Time-Series"功能,可以自动在实验者规定的时间内按照设定的时间间隔获取图像。只需设定所需的时间间隔以及所需图像数量,开启“Start T”功能键,即可进行实验。“Time-Series”功能大大减轻了实验者的劳动强度,对于荧光漂白恢复和钙离子成像等实验非常实用。
 
  注意事项1. 仪器周围要远离电磁辐射源;
 
  2. 环境无震动,无强烈的空气扰动;
 
  3. 室内具有遮光系统,保证荧光样品不会被外源光漂白;
 
  4. 环境清洁;
 
  5. 控制工作温度在5~25℃。
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