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看完这些你就知道什么是激光共聚焦显微镜了
发布时间:2020-07-20   点击次数:143次
  激光共聚焦显微镜是近代生物医学图象仪器。它是在荧光显微镜成象的基础上加装激光扫描装置,使用紫外光或可见光激发荧光探针。
 
  利用计算机进行图象处理,从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图象,以及在亚细胞水平上观察诸如Ca2+、pH值、膜电位等生理信号及细胞形态的变化。
 
  激光共聚焦显微镜是20世纪80年代中期发展起来并得到广泛应用的新技术 ,它是激光、电子摄像和计算机图像处理等现代高科技手段渗透,并与传统的光学显微镜结合产生的先进的细胞分子生物学分析仪器,在生物及医学等领域的应用越来越广泛,已经成为生物医学实验研究的必备工具 。
 
  传统荧光显微镜使用荧光物质标志细胞中的特定结构,不仅图像与背景的对比度增强,而且由于许多荧光显微镜的光源使用短波长的紫外光,大大提高了分辨率(δ=0.61·λ/NA,其中δ为显微镜的分辨率;λ为照明光线的波长;NA 为物镜的数值孔径)。
 
  但当所观察的荧光标本稍厚时,传统荧光显微镜一个难以克服的缺点就显现出来:焦平面以外的荧光结构模糊、发虚。原因是大多数生物学标本是层次区别的重叠结构(如耳蜗基底膜。
 
  其实是外毛细胞 、多种支持细胞 、神经纤维等组成的空间结构),,在普通光学显微镜下聚焦平面的变化, 会表现出不同的形态。假若荧光标记的结构在不同层次上都有分布,且重叠在一起,反射荧光显微镜不仅从焦平面上收集光量,而且来自焦平面上方或下方的散射荧光也被物镜所接收,荧光显微镜的光学分辨率就要大大降低 。
 
  在传统光学显微镜基础上,激光扫描共聚焦显微镜用激光作为光源,采用共轭聚焦原理和装置,并利用计算机对所观察的对象进行数字图像处理观察、分析和输出。
 
  其特点是可以对样品进行断层扫描和成像,进行无损伤观察和分析细胞的三维空间结构。
 
  同时,利用免疫荧光标记和离子荧光标记探针,该技术不仅可观察固定的细胞、组织切片,还可以对活细胞的结构、分子、离子及生命活动进行实时动态观察和检测,在亚细胞水平上观察诸如 CapH 值,膜电位等生理信号及细胞形态的变化,成为形态学、分子细胞生物学、神经科学、药理学、遗传学等领域中新一代强有力的研究工具 ,丰富了人们对细胞生命现象的认识。
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